Nature.com сайтына кіргеніңіз үшін рахмет.Сіз пайдаланып жатқан шолғыш нұсқасында шектеулі CSS қолдауы бар.Ең жақсы тәжірибе үшін жаңартылған шолғышты пайдалануды ұсынамыз (немесе Internet Explorer шолғышында үйлесімділік режимін өшіріңіз).Әзірше, үздіксіз қолдауды қамтамасыз ету үшін біз сайтты стильсіз және JavaScriptсіз көрсетеміз.
Посттравматикалық стресстің бұзылуы (PTSD) жарақатқа байланысты белгілерге қорқыныш реакцияларын бейтараптандыру қабілетінің бұзылуымен сипатталады.Адамдар мен жануарларды зерттеу қорқынышты басудың сәттілігін анықтайтын негізгі медиаторлар ретінде маңдай қыртысының кейбір аймақтарының қатысуындағы айырмашылықтарды көрсетеді, бірақ бұл аймақтардың дифференциалды қатысуын анықтайтын нейрондық тізбектердің өзара әрекеттесуі анық емес.Жоюды еске түсірудегі жеке айырмашылықтар нейрондық тізбек белсенділігіндегі айырмашылықтарда қалай көрінетінін жақсы түсіну үшін біз егеуқұйрықтың сублимбиялық қыртысының (IL) проекцияларын ретроградтық тракерлермен белгіледік және IL проекциялық нейрондарының ішіндегі және сыртындағы нейрондық проекцияларды салыстырдық.Біз бұл деректерді егеуқұйрықтардағы өшетін жадының сақталу дәрежесіне қарай топтастыру арқылы талдадық.Біз IL-жобалаушы жасушаларда артқы параталамустағы нейрондар егеуқұйрықтарда белсенділіктің жоғарылағанын анықтадық, бұл жақсы жойылуды еске түсірді.IL-проекциялаушы жасушалардан басқа, жақсы ажыратымдылығы бар егеуқұйрықтар мен вентральды гиппокамптың таңдалған аймақтарында Fos белсенділігінің жоғарылауы байқалды.Біздің нәтижелеріміз жойылуды еске түсірудегі айырмашылықтар IL проекцияларының ішіндегі және сыртындағы нейрондық белсенділіктің нақты үлгілерімен байланысты екенін көрсетеді.
Қорқыныш кондиционері бейтарап ынталандыру жағымсыз шартсыз ынталандырумен (UCS) байланысты болғанда пайда болады, осылайша бастапқы бейтарап ынталандыру, қазір шартты ынталандыру (CS), UCS болмаған кезде шартты қорқыныш реакциясын (CR) тудырады.Шартты қорқыныштың жойылуы UCS1 болмаған кезде CS-тің қайталануымен байланысты CR-ның CS-ге дейін төмендеуіне байланысты болды.Алдыңғы зерттеулер жарақаттан кейінгі стресстің бұзылуы (PTSD) шартты қорқыныш реакцияларының жойылуын есте сақтау қабілетсіздігімен байланысты екенін көрсетті2.Посттравматикалық стресстік бұзылысты емдеуге арналған когнитивті мінез-құлық терапиясының ірге тасы - үйренген қорқыныш реакцияларының жойылуына негізделген экспозициялық терапия3,4.Сондықтан кеміргіштердің жойылу қорқынышындағы жеке айырмашылықтарды және негізгі нейрондық механизмдерді зерттеу адамның жарақатқа және жарақаттан кейінгі стресстік бұзылысты емдеуге жауаптарындағы айырмашылықтарды анықтауға көмектесуі мүмкін.Табысты және сәтсіз жойылу естеліктерін ажырататын нейрондық механизмдерді анықтаудағы прогреске қарамастан, әлі де көп нәрсе ашылу керек.
Бұл жұмыста кеміргіштердің модельдері пайдалы, өйткені кеміргіштердің жойылуын еске түсіруде айтарлықтай жеке айырмашылықтар бар7,8,9,10.Популяция деңгейінде қорқыныштың жойылуының нейрондық механизмдерін зерттейтін алдыңғы жұмыс жойылуды еске түсіру үшін инфралибиялық кортекстің (IL) белсендірілуі қажет екенін көрсетті (11, 12, 13 сілтемелер, бірақ 14-ті қараңыз) және кейбір зерттеулерде қорқыныштың төмендеуі анықталды. ИЛ-дегі кеміргіштердің белсенділігі өте қорқынышты кеміргіштермен салыстырғанда жойылу туралы есте сақтау қабілеті нашар.Дегенмен, әлсіз жойылуын көрсететін кеміргіштердегі қорқынышты жоюға ИЛ-дің дифференциалды түрде қатысатын механизмдері түсініксіз.
Мүмкіндіктердің бірі - жеке адамдар арасындағы қорқыныштың жойылу жадысындағы айырмашылықтар белгілі бір афферентті ИЛ-дің дифференциалды активтенуінің нәтижесі болып табылады.Анатомиялық зерттеулер18 мидың әртүрлі қыртыстық және субкортикалық аймақтары ИЛ-ге тығыз проекциялар жіберетінін көрсетті, бұл өз кезегінде мидың көптеген аймақтарына эфферентті проекцияларды жібереді.Популяция деңгейіндегі зерттеулер амигдалаға ИЛ проекциялары қорқыныштың жойылуын20,21,22 алу үшін маңызды екенін және базолатеральды амигдаланың (BLA) IL кірісі де жойылуды үйренумен байланысты екенін көрсетті.IL орталықтандырылған тізбектердің жойылуды еске түсіруге қатысуы туралы зерттеулер азырақ, дегенмен соңғы жұмыс вентральды және дорсальды гиппокамптың IL болжамына қатысатынын көрсетеді.ИЛ-дің таламустың рекомбинирлеуші ​​ядросына эфферентті проекциялары да қорқыныштың жойылуын есте сақтауға қатысады.
Бұл алдыңғы зерттеулер жойылуды еске түсіруге қатысатын нейрондық тізбектердің өзара әрекеттесуінің суретін сала бастады, бірақ IL-орталықталған нейрондық тізбектердегі белсенділіктің жойылуды еске түсірудегі жеке айырмашылықтарға әсер ететіні туралы деректер өте аз.Мұнда біз жеке адамдар арасындағы қорқыныштың жойылу жадысындағы айырмашылықтар мидың белгілі бір аймақтарындағы IL кірісін белсендірудегі өзгерістермен байланысты екенін анықтауға тырыстық.Атап айтқанда, таламустың (PVT), клавикуланың (CLA), BLA және вентральды гиппокамптың (vHPC) паравентрикулярлық ядросындағы IL афферентті жасушаларының активтенуін бағаладық.Бұл ми аймақтары таңдалды, өйткені олар IL-ге тығыз проекциялар жібереді және олар қорқыныштың жойылуына қатысты болуы мүмкін деп күдіктенуге негіз бар 18.Мысалы, жақында жүргізілген зерттеу PVT, қорқыныштың пайда болуына және көбеюіне қатысатын белгілі аймақ жойылып бара жатқан көбею үшін қажет екенін көрсетті.Бұған қоса, алдыңғы зерттеулер жойылу жадын білдіретін егеуқұйрықтарда базальды амигдаланың және vHPC белсенділігінің жоғарылауын көрсетті.Ақырында, алдыңғы жұмыстардың ешқайсысы оның жойылудағы рөлін бағаламағандықтан, клаустрманы талдау анағұрлым зерттеушілік болып табылады.Дегенмен, соңғы жұмыс оның қорқынышты контекстік шарттауда рөл атқаратынын көрсетеді29.
Вирустық GFP-конъюгацияланған ретроградтық тракерлер мінез-құлық сынағы алдында егеуқұйрықтардың ИЛ-іне енгізілді және IL афференттеріндегі Fos белсенділігі жойылуды қайталау, қорқынышты еске түсіру және мінез-құлық сынағына ұшырамаған егеуқұйрықтарда өлшенді.Біздің нәтижелеріміз артқы паравентрикулярлық таламустан ИЛ-ге дейінгі проекциялар жойылуды сәтті еске түсіретін егеуқұйрықтарда белсенділіктің жоғарылауын көрсетеді.IL болжамдарына қоса, жақсы регрессияға ұшыраған егеуқұйрықтарда клавикуланың және вентральды гиппокамптың кейбір аймақтарындағы жүйке белсенділігі жоғарылады.Біздің нәтижелеріміз IL-ге жобаланатын ішкі және сыртқы нейрондық белсенділіктің үлгілері қорқыныштың жойылу жадысындағы жеке айырмашылықтармен байланысты екенін көрсетеді.
Сынақтар ретінде Charles River Laboratories (Raleigh, NC) алынған 54 ересек еркек Спраг-Доули егеуқұйрықтары (келу кезінде 300-325 г) пайдаланылды.Егеуқұйрықтар 12 сағаттық жарық/қараңғы циклде (таңертеңгі сағат 7-де жанады) тамақ пен суға еркін қол жетімділікпен жұппен орналастырылды.Бұл эксперименттер үшін егеуқұйрықтардың екі тобы (n = 28 және n = 26) пайдаланылды.Өлім, хирургиялық қате, мақсатты жерде GFP экспрессиясының болмауы, тіндердің нашар сапасы және мінез-құлық проблемалары (Әдістемелерде түсіндіріледі) жойылғаннан кейін жойылуды еске түсіру тобына 21 егеуқұйрықтар және қорқынышты еске түсіру тобына 7 егеуқұйрықтар, үй торлары кірді.топ 7 егеуқұйрықтан тұрды (соңғы талдауға 35 егеуқұйрық қосылды).Барлық процедуралар Стони Брук университетінің институционалдық жануарларды күту және пайдалану комитетімен мақұлданды және ARRIVE нұсқаулығына (https://arriveguidelines.org) және NIH зертханалық жануарларды күту және пайдалану жөніндегі нұсқаулықтарына сәйкес болды.
Егеуқұйрықтар операциядан екі күн бұрын емделді.Егеуқұйрықтар кетаминмен (87 мг/кг) және ксилазинмен (10 мг/кг) жансыздандырылды, стереотаксикалық аппаратқа (Stoelting, Woodale, IL) орналастырылды және IL-ге AAVrg-CAG-GFP (Addgene, 30) біржақты инъекцияларын алды.(сол және оң жақ инъекцияларды теңестіру).Инъекция үшін 22 калибрлі канюля орнына түсірілді (AP: + 3,00, ML: ± 0,6, DV: – 5,2).Минутына 0,15 мкл жылдамдықпен 0,6 мкл вирус беру үшін бағыттаушы канюляға 28G ішкі канюляны (PE 20 түтігі арқылы инфузиялық сорғыға жалғанған) салыңыз және инфузия бұзылмаған соң 5 минут бойы орнында қалдырыңыз..Тігіс тігілгеннен кейін егеуқұйрықтарға мелоксикам (1 мг/кг) енгізілді және олар қозғала бастағанда торларына қайтарылды.Вирусты қалпына келтіруге және ретроградтық тасымалдауға мүмкіндік беру үшін егеуқұйрықтар өз торларында шамамен 7 апта ұсталды.Үш егеуқұйрық анестезия кезінде өлді, нәтижесінде 51 егеуқұйрық (94%) операциядан сәтті қалпына келді.
Барлық процедуралар 45,7 см × 43,2 см × 43,2 см дыбыс жұтатын оқшаулау қораптарында (Clever Sys. Inc.) орналасқан 32 см × 25 см × 21 см кондиционер камераларында (Clever Systems Inc., Reston, VA) орындалды.).Жоюды үйрену және жойылуды еске түсіру сеанстары кезінде контекст бастапқы шартты контекстен басқаша болу үшін өзгертілді.А шартына (қорқыныш тудыратын) 28 вольтты қыздыру шамы, тұрмыстық шамдар (Chicago Micro Lighting, Ұлыбритания), ал В шартына (өшіп кетуді үйрету, өшуді еске түсіру сынағы және қорқынышты еске түсіру сынағы) инфрақызыл жарықдиодты шамдар (Univivi IR Illuminator, Шэньчжэнь) болды. ., Қытай;U48R).Сонымен қатар, A контекстінде тот баспайтын болаттан және плексигласс қабырғалары бар дірілге қарсы тақталы еден болса, В контекстінде еденге және қабырғаларға салынған боялған металл кірістірулер бар.33,5 см x 21,3 см иілген металл кірістіруді стандартты кондициялау камерасына қою арқылы контекст B пішіні де өзгертілді.Сонымен қатар, А контекстінде камералар 5% сірке қышқылымен сүртілді, ал В контекстінде камералар 5% аммоний гидроксидімен сүртілді.Соңында, В контекстінде егеуқұйрықтар тест бөлмесіне арбалардағы торларда айналдырылғаннан гөрі шелектермен әкелінді.Мінез-құлық сеанстары үстіңгі камерамен жазылды және әрбір камераның бейне сигналы пиксель өзгерістеріне негізделген өшуі әрекетін бағалайтын бағдарламалық құралға (FreezeScan 2.00, Clever Sys. Inc., Reston, VA) жіберілді.Параметрлер компьютер бағалаған өшудің әрекеті қолмен есептелген оқытылған бақылаушылардың мінез-құлқына сәйкес келетін етіп таңдалды.30 секундтық аралықта жинақталған қату уақытының пайызын көрсететін мән.
Барлық мінез-құлық бағдарламалары жарық/қараңғы циклдің жарық бөлігінде орындалады.Егеуқұйрықтар мінез-құлық процедуралары басталғанға дейін 5 күн бұрын емделді және емдеудің соңғы үш күнінде мінез-құлық бөлмесіне тасымалданды.Мінез-құлықты сынаудың бірінші күнінде жойылып кетуді еске түсіретін егеуқұйрықтар тобы қорқынышты шартты рефлекске орналастырылды, содан кейін 6 минуттық ынталандырылмаған акклиматизация кезеңі берілген А контекстіне орналастырылды, содан кейін 4 кГц, 76 дБ, 30 с екі комбинация берілді. .тон және жалпы тоқтату, 1,0 мА, соққы 1 с (2 мин ITI).Барлық мінез-құлық жаттығулары үшін егеуқұйрықтар тітіркендіргіш соңғы ұсынылғаннан кейін 2 минуттан кейін торларға қайтарылды.Келесі күні жойылып кетуді еске түсіру тобындағы егеуқұйрықтар В контекстік бөлмесіне орналастырылды және 6 минуттық үйреншікті кезеңнен кейін жойылу жаттығулары ретінде 20 дыбыстық көрсетілім (2 мин ITI) орындады.Келесі күні жойылып кету сынағы ретінде 6 минуттық акклиматизация кезеңінен кейін жойылу көбею тобындағы егеуқұйрықтар B контекстінде 4 тонға ұшырады.Жою жады тобындағы егеуқұйрықтар мінез-құлық сеансынан кейін 60 минуттан кейін перфузияланды.Қорқыныш туралы естеліктерді тудыратын бақылау егеуқұйрықтары тобы А контекстіндегі қорқынышты шартты жауаптың бірінші күні бірдей процедураға ұшырады. Қырық сегіз сағаттан кейін егеуқұйрықтар В контекстік бөлмесіне орналастырылды және 4 аудио презентацияға ұшырады (2- минут ITI) еске түсіру сынағы ретінде.6 минуттық акклиматизация кезеңінен кейін қорқыныш.Егеуқұйрықтар мінез-құлық сессиясынан кейін 60 минуттан кейін перфузияланды.Үй бақылаушы егеуқұйрықтар тобы эксперимент бойы өз үй торларында қалды және эксперименталды егеуқұйрықтармен бір күні перфузияланды.Егеуқұйрықтардың екі тобының әрқайсысы екі қатарға бөлініп, әр топтағы жануарлардың саны сериялар арасында теңестірілді.Қорқыныш туралы естеліктер тобындағы бір егеуқұйрық талдаудан шығарылды, себебі ол қорқынышты күйге келтіру белгілерін көрсетпеді (қорқыныш естеліктерін тексеру кезінде уақыттың 15% -дан аз қатуы).Мінез-құлық уақыт кестесінің диаграммасын 2А суретін қараңыз.
Егеуқұйрықтар Fatal Plus ерітіндісімен (100 мг/кг) артық дозаланған, содан кейін мұздай салқын 10% PBS, содан кейін 10% буферленген формалинмен перфузияланған.Миды алып тастап, формалиндегі 30% сахароза ерітіндісінде 4°C температурада шамамен 1 апта бойы сақтады.Содан кейін ми мұздатылған және қалыңдығы 40 мкм криостатқа кесілген.Бөлімдер 4°C температурада 10% PBS ішінде дәйекті түрде сақталды.Содан кейін иммунофлуоресценция мидың қызығушылық аймағын қамтитын еркін қалқымалы секцияларда орындалды.Бөлімдер әрқайсысы 5 минуттан 10% PBS ішінде 3 рет жуылды.Содан кейін кесінділер қалыпты ешкі сарысуының 5% блоктаушы ерітіндісінде бөлме температурасында 2 сағат бойы инкубацияланды, содан кейін 10% PBS ішінде әрқайсысы 5 минуттан тағы үш рет жуылды.Содан кейін бөлімдер 10% PBS ішінде 1% BSA сұйылтылған бастапқы антиденелерде (c-Fos, #2250, 1:500) (Cell Signaling, Danvers, MA) 4°C-те түнде инкубацияланды.Келесі күні кесінділер 4°C температурада 30 минут бойы 10% PBS, содан кейін 10% PBS ішінде 3 рет 5 минут бойы жуылды және қайталама антиденемен (Alexa Fluor 594 ешкіге қарсы қоян, қызыл конъюгат, 1:500) инкубацияланды. ).) (Invitrogen, Carlsbad, CA) бөлме температурасында 2 сағат.5 минут бойы 10% PBS ішінде 3 қосымша жуудан кейін кесінділер шыны слайдтарға салынып, Fluoromount-G (Invitrogen) арқылы тығыздалған.3G суретіндегі иммундық бояудың репрезентативті суреттерін қараңыз.
Infinity3 сандық камерасын (Lumenera, Оттава, Онтарио, Канада) және Zeiss микроскопына жалғанған жеңіл қозғалтқышты (Lumencor, Бивертон, OR) пайдаланатын флуоресцентті микроскоп қызықтыратын мидың әрбір аймағынан, соның ішінде бейнелері бар бөлімдерден кескін алу үшін пайдаланылды. Иммунофлуоресценциясыз ИЛ.инъекция орнының дұрыс орналасуын растау үшін орындалады.Жасушаларды санау үшін пайдаланылатын кескіндер 20 есе үлкейту кезінде алынды.Әрбір ұлпа бөлімі үшін GFP визуализациясына мүмкіндік беретін сүзгісі бар бір суретті және екінші антиденедегі Alexa Fluor қызыл конъюгатын визуализациялауға мүмкіндік беретін сүзгісі бар бір суретті түсіріңіз және кескін үшін бейнелеу бағдарламалық құралы (Infinity Analyze, 3 нұсқа) пайдаланылды. қабаттасу.Бірдей экспозиция уақытын пайдаланып, мидың барлық аймақтарының барлық кескіндерін алыңыз және параметрлерді алыңыз.Алты егеуқұйрық талдаудан шығарылды, себебі вирустың негізгі берілуі IL шегінен тыс (88% соққы көрсеткіші) болды.Тағы сегіз егеуқұйрықтар алынып тасталды, себебі вирус IL-ге шабуылдағанымен, олар барлық қызығушылық танытқан мақсатты ми аймақтарында жеткілікті GFP экспрессиясын көрсетпеді.Сонымен қатар, тіндердің сапасы нашар болғандықтан, бір егеуқұйрық алынып тасталды.
Әрбір кескін үшін бірдей процедураны пайдаланып J (NIH) кескініндегі фондық шуды азайту үшін жарықтық пен контрастты реттеңіз.Жалпы ретроградтық таңбаланған ұяшықтар, жалпы Fos-таңбаланған ұяшықтар және жалпы қос таңбаланған ұяшықтар үшін ұяшықтарды санауды Image J цитометр қосылатын модулін пайдаланып жануарларды анықтамаған экспериментатор қолмен орындады.Жасуша саны жасушалар/мм2 қалыпқа келтірілді.IL-проекциялаушы жасушалардағы Fos экспрессиясын талдау үшін қос таңбаланған ұяшықтардың саны ретроградты таңбаланған жасушалардың жалпы санына дейін қалыпқа келтірілді.mBLA, mvHPC және pvHPC талдауы үшін бірнеше 20x кескіндеріндегі ұяшықтар саны қосылды және ұяшықтар/мм2 қалыпқа келтірілді.Ми аймақтарының қалған бөлігін талдау үшін 20x кескіні немесе 20x кескінінің бір бөлігі талданды және жасушалар/мм2 қалыпқа келтірілді.vHPC талдауы CA1, CA2 және субдоминантты vHPC аймақтарын қамтыды.1-суретте ұшақтың алдыңғы-артқы шекарасын сызатын суреттермен талданған ми аймақтары көрсетілген.
Қызықтыратын ми аймақтарының аббревиатуралары және орналасуы.Қолжазбада келтірілген қысқартулар мен ми аймақтарының орналасуын түсіндіру.Қоғамдық домен ми картасы Свонсоннан (2004) алынған Brain Map: Structure of the Rat Brain, 3-ші басылым, Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 халықаралық лицензиясы бойынша лицензияланған (https://creativecommons.org/licenses/by-nc/ 4.0) ./), https://larrywswanson.com сайтында жүктеп алуға болады.
Мұздату уақытының пайызы аралық аралықтарды қоспағанда, 30 секундтық тондық ойнату кезеңі ішінде орташа есеппен алынады.Сөнуді еске түсіру мөлшерлемесі сөнуді еске түсіру кезіндегі өшу уақытының пайызын алғашқы 4 сөну жаттығуларының сынақтары кезіндегі өшудің пайызы ретінде көрсету арқылы есептелді (төрт сөнуді еске түсіру дыбысы кезінде әлсіреу/алғашқы төрт сөну жаттығу дыбысы кезінде өшуі*100).Төмен ұпайлар жақсы өшетін жадты көрсетеді, ал жоғары ұпайлар нашар өшетін жадты көрсетеді.Егеуқұйрықтар жойылуды еске түсіру көрсеткіші бойынша сұрыпталды, жойылып кетуді еске түсіру баллының жоғарғы үштен бір бөлігіндегі егеуқұйрықтар «жаман жойылған егеуқұйрықтар» санатына жатқызылды және жойылуды еске түсіру баллының соңғы үштен екі бөлігіндегі егеуқұйрықтар «жақсы» деп жіктелді.Жад өшетін егеуқұйрықтар.
Параметрлік емес сынақтар пайдаланылады, себебі деректер қалыпты таралу және/немесе дисперсиялардың біртектілігі туралы болжамдарды жиі бұзады.Спирмен дәрежесінің корреляциясы жойылуды еске түсіру сынағына ұшыраған барлық егеуқұйрықтарда қызығушылық тудыратын ми аймақтарындағы Fos маркерлері мен қосарлы маркерлер арасында маңызды байланыс бар-жоғын анықтау үшін пайдаланылды.Екі тәуелсіз топ арасында айырмашылық бар-жоғын анықтау үшін Mann-Whitney U-тесті қолданылды.Крускал-Уоллис сынағы 2 немесе одан да көп топтардың бір-бірінен айырмашылығы бар-жоғын анықтау үшін қолданылады, ал Крускал-Уоллис статистикасы маңызды болған кезде Даннның көптік салыстыру тесті қолданылады.Жоюды оқыту кезіндегі әлсіреу пән аралық фактор ретінде топпен дисперсияны талдаудың қайталанатын шаралары және пәнішілік фактор ретінде тест арқылы бағаланды. Барлық статистикалық сынақтар үшін p <0,05 болғанда нәтижелер маңызды деп саналды. Барлық статистикалық сынақтар үшін p <0,05 болғанда нәтижелер маңызды деп саналды. Результаты считались значимыми при p < 0,05 үшін барлық статистикалық тестов. Нәтижелер барлық статистикалық сынақтар үшін p <0,05 мәнді деп саналды.当所有统计检验的p < 0,05 时，结果被认为是显着的。当所有统计检验的p < 0,05 时，结果被认为是显着的。 Результаты считались значимыми при p < 0,05 үшін барлық статистикалық тестов. Нәтижелер барлық статистикалық сынақтар үшін p <0,05 мәнді деп саналды.
2-суретте эксперименттік уақыт сызбасы (2А-сурет) және жойылуға ұшыраған барлық егеуқұйрықтардың жиілігінің таралуы көрсетілген (2В-сурет). Жақсы және нашар жойылу топтарындағы егеуқұйрықтар осы есептелген жойылуды еске түсіру ұпайларында айтарлықтай ерекшеленді (U = 0, p < 0,001) (2С-сурет). Жақсы және нашар жойылу топтарындағы егеуқұйрықтар осы есептелген жойылуды еске түсіру ұпайларында айтарлықтай ерекшеленді (U = 0, p < 0,001) (2С-сурет). Крысы в ​​​​группах с хорошим және плохим угашением значительно различались по этим рассчитанным показателям припоминания угашения (U = 0, p <0,001) (рис. 2C). Жақсы және нашар жойылу топтарындағы егеуқұйрықтар осы есептелген жойылуды еске түсіру жылдамдығында айтарлықтай ерекшеленді (U=0, p<0,001) (2С-сурет).在这些计算的灭绝回忆分数中，良好和不良灭绝组中的大鼠存在显着差0.（）0.（＂ 2C). U = 0，p <0,001）（图2C， В этих рассчитанных показателях припоминания угашения крысы в ​​группах с хорошим және плохим угашением значительно различались (U = 0, p <0,001) (рис. 2C). Осы есептелген жойылуды еске түсіру жылдамдықтарында жақсы және нашар жойылу топтарындағы егеуқұйрықтар айтарлықтай ерекшеленді (U = 0, p <0,001) (2С-сурет).Қорқыныш шартты рефлексті сессияның негізгі кезеңінде (X2(2) = 2,746, p = 0,253) жақсы сөнуі, нашар жойылуы және қорқынышты еске түсіруі бар топтар арасында қату уақытында айтарлықтай айырмашылық болмады (2D сурет).Сонымен қатар, қорқынышты шартты рефлекстің бірінші реңкін көрсету кезінде жақсы сөну, нашар сөну және қорқынышты еске түсіру (X2(2) = 1,107, p = 0,575) топтар арасында қату уақытында айтарлықтай айырмашылық болмады, өйткені сондай-ақ екінші тондар кезінде қорқыныш кезінде.Кондиционерлеу сессиясы кезінде жақсы сөну, нашар сөну және қорқынышты еске түсіру (X2(2) = 2,214, p = 0,331) топтар арасында қату уақытында айтарлықтай айырмашылық болды (2D сурет).Сондай-ақ бастапқы жойылу жаттығулары кезеңінде жақсы және нашар жойылу топтары арасында жоғалу уақытында айтарлықтай айырмашылық болған жоқ (U = 45,00, p = 0,799) (2D-сурет). Әрі қарай, сынақ блогының (бір блокқа 5 тонна) жойылу жаттығулары (F (2,884, 54,80) = 8,331, p < 0,001) кезінде қатып қалу уақытына айтарлықтай негізгі әсері болды, бұл жойылуды үйренудің орын алғанын көрсетеді (2D-сурет). ). Әрі қарай, сынақ блогының (бір блокқа 5 тонна) жойылу жаттығулары (F (2,884, 54,80) = 8,331, p < 0,001) кезінде қатып қалу уақытына айтарлықтай негізгі әсері болды, бұл жойылуды үйренудің орын алғанын көрсетеді (2D-сурет). ). Затем наблюдался значительный основной эффект пробного блока (5 тонов на блок) на время, затрачиваемое на замирание во время тренировки угашения (F (2,884, 54,80) = 8,331, p <0,001), бұл мүмкін емес рис. 2D). Содан кейін сынақ блогының (бір блокқа 5 тонна) жойылу жаттығулары кезінде қатуға кететін уақытқа айтарлықтай негізгі әсері болды (F(2,884, 54,80) = 8,331, p <0,001), бұл жойылуды үйрену жүріп жатқанын көрсетеді (Cурет 1). 2D). ).接下来，在消退训练期间，试块（每块5 音）对冻结时间有显着的主有显着的主有显48.（F8=8.， 31，p <0,001），表明发生了消退学习（图2D）） .接下来，在消退训练期间，试块（每块5 音）对冻结时间有显着的主有显着的主有显48.（F8=8.， 31，p <0,001），表明发生了消退学习（图2D）） . Затем, во время обучения угашению, пробные блоки (5 тонов на блок) оказали значительное основное влияние на время замирания (F (2,884, 54,80) = 8,331, p <0,001), бұл мүмкін емес 2D). Содан кейін, жойылуды үйрену кезінде сынақ блоктары (бір блокқа 5 тонна) жоғалу уақытына маңызды негізгі әсер етті (F(2,884, 54,80) = 8,331, p <0,001, бұл жойылуды үйрену жүріп жатқанын көрсетеді (.2D-сурет). .Дегенмен, жойылу тобы (F(1, 19) = 3.091, p = 0.095) жойылу жаттығуларының бүкіл кезеңінде сөну уақытына айтарлықтай әсер еткен жоқ және сынақ блогы мен жойылу тобы (F(4) арасында өзара әрекеттесу болған жоқ. , 19)) .76) = 1,890, p = 0,121) (2D-сурет). Тестілеу сессиясы кезінде жақсы жойылу, нашар жойылу және қорқынышты еске түсіру топтары арасында бастапқы кезеңде қатып қалу уақытында айтарлықтай айырмашылық болды (X2 (2) = 8,569, p = 0,014), сондықтан қорқынышты еске түсіру тобы айтарлықтай қатып қалды. жақсы жойылу тобынан артық (Орташа дәреже айырмашылығы = 10,57, p = 0,017), бірақ нашар жойылу тобы емес (Орташа дәреже айырмашылығы = - 3,714, p > 0,999) (2D-сурет). Тестілеу сессиясы кезінде жақсы жойылу, нашар жойылу және қорқынышты еске түсіру топтары арасында бастапқы кезеңде қатып қалу уақытында айтарлықтай айырмашылық болды (X2 (2) = 8,569, p = 0,014), сондықтан қорқынышты еске түсіру тобы айтарлықтай қатып қалды. жақсы жойылу тобынан артық (Орташа дәреже айырмашылығы = 10,57, p = 0,017), бірақ нашар жойылу тобы емес (Орташа дәреже айырмашылығы = - 3,714, p > 0,999) (2D-сурет).Тестілеу сессиясы кезінде жақсы жойылу, нашар жойылу және қорқынышты еске түсіру топтары арасында бастапқы кезеңде қатып қалу уақытында айтарлықтай айырмашылық болды (X2(2) = 8,569, p = 0,014), сондықтан қорқынышты еске түсіретін топ қатып қалды. айтарлықтай.больше, чем в группе хорошего вымырания (средняя разница рангов = 10,57, p = 0,017), бірақ не в группе плохого вымырания (средняя разница рангов = -3,714, p> 0,999) (рис. 2D). жақсы жойылу тобына қарағанда үлкен (орта дәрежедегі айырмашылық = 10,57, p = 0,017), бірақ нашар жойылу тобында емес (орташа дәреже айырмашылығы = -3,714, p > 0,999) (2D-сурет).在测试期间，良好消退组、不良消退组和恐惧回忆组在基线期冻结时间，良好消退组、不良消退组和恐惧回忆组在基线期冻结时间，良好消退组、不良消组、 (2) = 8,569，p = 0,014），因此恐惧回忆组冻结显着超过良好的灭绝组（平均秩差= 10,57，p = 0,017），但不是差的灭绝组（平均秩差= – 3,714，，，（9） 0,99 б.在 测试 期间 ， 良好 消退组 、 消 退组 和 恐惧 在 基线期 冻结 时间 冻结 时间 时间（（x2 (2) = 8,569 ， p = 0,014） ， 恐惧 回忆组 冻结 显着 良好 的 组 组 组 组组 组 组（平均秩差= 10,57，p = 0,017），但不是差绝组（平均秩差= – 3,714）0.（99 бет > В течение периода тестирования наблюдалась значительная разница между группой с хорошим угашением, группой с плохим угашением и группой с припоминанием страха с точки зрения времени замирания на исходном уровне (X2 (2) = 8,50 страницы, повести). зает значительно чаще , чем группа с хорошим вымиранием (средняя разница рангов = 10,57, p = 0,017), бірақ не группа с плохим вымиранием (средняя разница рангов = -3,714, p> 0,999) (рис. 2D). Сынақ кезеңінде жақсы жойылу тобы, нашар жойылу тобы және қорқынышты еске түсіру тобы арасында бастапқы деңгейде қату уақыты (X2(2) = 8,569, p = 0,014) бойынша айтарлықтай айырмашылық болды, сондықтан қорқынышты еске түсіру топ жойылуы жақсы топқа қарағанда (орташа дәреже айырмашылығы = 10,57, p = 0,017) айтарлықтай жиі қатады, бірақ нашар жойылатын топқа емес (орташа дәреже айырмашылығы = -3,714, p > 0,999) (2D-сурет).Жақсы жойылу тобы, нашар жойылу тобы және қорқынышты еске түсіру тобы сынақ сессиясының дыбыстық көрсетілімі кезінде айтарлықтай әр түрлі жоғалу уақыттарына ие болды (X2(2) = 14,93, p = 0,001), сондықтан жақсы жойылу тобы айтарлықтай аз болды. уақыт.қату уақыты әлсіз жойылу тобына (орташа дәреже айырмашылығы = 9,286, p = 0,044) және қорқыныш жады тобына (орташа дәреже айырмашылығы = 13,86, p = 0,001) қарағанда (2D-сурет).
Жоюды еске түсірудегі жеке айырмашылықтар.(A) Хирургиялық және мінез-құлық шараларының жоспары.(B) Жоғалған жады ұпайларындағы жеке айырмашылықтарды көрсететін жиілікті бөлу.(C) Жоюды еске түсірудің есептелген ұпайларына негізделген топтар екі түрлі фенотипті білдіретіндігінің дәлелі.(D) Шартты қорқыныш рефлексті сеансының 30 секундтық ұяшықтарында егеуқұйрықтар нашар жойылу, жақсы жойылу және қорқынышты еске түсіру үшін қатып қалу уақытының орташа пайызы, 20, 30 с тондарда, жойылуды үйрену сессиясы кезінде 5 блокқа ыдырайды (4 тон ) .әрқайсысы) және төрт тонмен сөну және қорқыныш туралы естеліктер сеанстарында.Қате жолақтары орташа мәннің стандартты ауытқуын білдіреді. *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001, ****p < 0,0001. *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001, ****p < 0,0001. *р < 0,05, **р < 0,01, ***р < 0,001, ****р < 0,0001. *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001, ****p < 0,0001. *p <0,05，**p <0,01，***p <0,001，****p <0,0001. *p <0,05，**p <0,01，***p <0,001，****p <0,0001. *р < 0,05, **р < 0,01, ***р < 0,001, ****р < 0,0001. *p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001, ****p < 0,0001.
IL-ге ретроградтық индикатор енгізілді (3А-сурет) және қызығушылық аймағының алдыңғы-артқы осі бойындағы GFP+ жасушаларының саны анықталды (3B-F-сурет).Алдыңғы, ортаңғы және артқы PVT (X2(2) = 8,200, p = 0,017) арасындағы GFP+ жасушаларының санында айтарлықтай айырмашылық болды, сондықтан mPVT aPVT (орташа дәреже) Айырмашылығына қарағанда GFP+ жасушаларын айтарлықтай көп көрсетті.= 18,37, p = 0,035) және pPVT (орта дәрежедегі Айырмашылық = 17,71, p = 0,045) (3С-сурет).Бірнеше жануарлар pCLA-да ешқандай GFP+ жасушаларын анықтамаса да, сондықтан осы аймақтағы белсенділікті картаға түсіре алмаса да, алдыңғы, ортаңғы және артқы CLA арасында айтарлықтай айырмашылық болмады (X2(2) = 5,596, p = 0,061).GFP+ ұяшықтарының саны (3D-сурет).Содан кейін, кейбір GFP+ жасушалары aBLA немесе avHPC-де бірнеше егеуқұйрықтарда табылғандықтан, осы аймақтардың ортасы мен артқы жағы ғана талданған.Ортаңғы және артқы BLA (U=393, p=0,009) GFP+ жасушаларының санында айтарлықтай ерекшеленді, сондықтан pBLA mBLA-ға қарағанда көбірек IL проекцияларын көрсетті (3E-сурет).Сол сияқты, ортаңғы және артқы vHPC арасында айтарлықтай айырмашылық болды, сондықтан pvHPCs mvHPC-ге қарағанда көбірек IL проекцияларын көрсетті (U = 403,5, p = 0,014) (3F-сурет).3G суреті Fos, aavRG-GFP және қос таңбаланған ұяшықтарды көрсететін үлгілі кескін болып табылады.
Бүкіл ми аймағындағы IL афференттерінің санын анықтаңыз.(A) Бүкіл егеуқұйрық ИЛ-де aavRG-CAG-GFP таралуының схемалық көрінісі.(B) Қызығушылықты оятатын ми аймағындағы әр түрлі алдыңғы артқы орындардағы ретроградтық маркерлердің репрезентативті кескіндері.Алдыңғы-артқы ось (C) паравентрикулярлық таламус, (D) клавикула, (E) базолатеральды бадамша және (F) вентральды гиппокамп бойынша ретроградтық таңбалаудың сандық көрсеткіштері.(G) aPVT ішіндегі ретроградты aavRG таңбалауын, Fos таңбалауын және қос aavRG және Fos таңбалауын көрсететін өкілдік кескіндер.Қате жолақтары орташа мәннің стандартты ауытқуын білдіреді. *p <0,05, **p <0,01. *p <0,05, **p <0,01. *р < 0,05, **р < 0,01. *p <0,05, **p <0,01. *p <0,05，**p <0,01. *p <0,05，**p <0,01. *р < 0,05, **р < 0,01. *p <0,05, **p <0,01.Масштаб жолағы 100 мкм.А панеліндегі қоғамдық домендік ми картасы Свонсон (2004) «Ми картасы: егеуқұйрық миының құрылымы, 3-ші басылымы» кітабынан шығарылған, Creative Commons Attribution-NonCommons 4.0 халықаралық лицензиясы (https://creativecommons.org/licenses/by-nc) бойынша лицензияланған. )./4.0/) https://larrywswanson.com сайтында жүктеп алуға болады.
Ғаламдық және IL проекциясына тән Fos белсенділігі барлық егеуқұйрықтарда aPVT, mPVT және pPVT-де талданды.aPVT-де (X2(3) = 3,888, p = 0,274) (4А-сурет) Фос экспрессиясында жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй жасушалары топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болған жоқ және Фос арасында маңызды корреляция болған жоқ. aPVT-де өрнек пен жойылуды еске түсіру (rs = 0,092, p = 0,691) (4В-сурет) немесе aPVT IL афферентіндегі Fos өрнекі мен жойылуды еске түсіру (rs = 0,143, p = 0,537) (4D сурет).Дегенмен, aPVT IL афференттерінде Фос экспрессиясы жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй жасушаларының топтары (X2 (3) = 15.05, p = 0.002) арасында айтарлықтай ерекшеленді, сондықтан қорқынышты еске түсіру тобы салыстырмалы түрде жақсы жойылуды көрсетті.регрессия (орташа дәреже айырмашылығы = 11,54, p = 0,003), нашар регрессия (орташа дәреже айырмашылығы = 10,57, p = 0,034) және үй ұяшығы (орташа дәреже айырмашылығы = 12,79, p = 0,005) топтары (4С-сурет).Әрі қарай, mPVT (X2(3) = 2,272, p = 0,518) (Cурет 4E) және mPVT ішіндегі Fos экспрессиясы үшін жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй жасушалары топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болмады..Жоюды еске түсірумен маңызды корреляция (rs = 0,168 p = 0,468) (4F-сурет).IL афферентті mPVT жасушаларында (X2 (3) = 9.252, p = 0.026) Фос экспрессиясындағы жақсы, жаман, қорқынышты еске түсіру және үй жасушалары топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болғанымен, пост hoc салыстыру ешқайсысын немесе екеуін анықтаған жоқ.Топтар арасындағы елеулі айырмашылықтар (4G-сурет).Сонымен қатар, IL-афферентті mPVT жасушаларындағы Fos экспрессиясы мен жойылуды еске түсіру (rs = 0,174, p = 0,450) арасында маңызды корреляция болмады (4Н сурет). Содан кейін, pPVT (X2 (3) = 13,89, p = 0,003) фос өрнекіндегі жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй торы топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды, осылайша жақсы жойылу тобы (Орташа дәреже) Айырма = 14,96, p = 0,010), бірақ нашар жойылу (Орташа дәреже айырмашылығы = 12,86, p = 0,113) немесе қорқынышты еске түсіру тобы (Орташа дәреже айырмашылығы = 2,571, p > 0,999) емес, көбірек Fos өрнегі көрсетілген. үй торы тобы (4I-сурет). Содан кейін, pPVT (X2 (3) = 13,89, p = 0,003) фос өрнекіндегі жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй торы топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды, осылайша жақсы жойылу тобы (Орташа дәреже) Айырма = 14,96, p = 0,010), бірақ нашар жойылу (Орташа дәреже айырмашылығы = 12,86, p = 0,113) немесе қорқынышты еске түсіру тобы (Орташа дәреже айырмашылығы = 2,571, p > 0,999) емес, көбірек Fos өрнегі көрсетілген. үй торы тобы (4I-сурет). Далее, наблюдалась значительная разница между группами с хорошим угасанием, плохим угашением, отзывом страха и домашней клеткой в ​​е экспрессии Fos в pPVT (X2 (3) = 13,89, p = 0,003), так что уганы с реңкпен Айырма = 14,96, p = 0,010), бірақ не в группе плохого угашения (средняя ранговая разница = 12,86, p = 0,113) или группы воспоминаний о страхе (средняя ранговая разница = 2,571, p > 0) выраженная экспрессия Фос, чем в группе группа домашних клеток (рис. 4I). Әрі қарай, жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және pPVT-дегі Фос экспрессиясындағы үй жасушалары топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды (X2 (3) = 13,89, p = 0,003), осылайша жақсы жойылу тобы (орташа дәрежедегі айырмашылық. = 14,96, p = 0,010), бірақ нашар жойылу тобында емес (орташа дәреже айырмашылығы = 12,86, p = 0,113) немесе қорқынышты есте сақтау тобында (орташа дәреже айырмашылығы = 2,571, p > 0,999) емес, Fos өрнекті келесіге қарағанда айқынырақ көрсетті. үй жасушаларының тобы (4I-сурет).其次 ， ppvt 中 fos 表达 好 消 、 差消 、 恐惧 和 家笼组 之间 存在 显间 存在 显睂 （38 （39） ， p = 0,003） 使得 消组 （（(орташа дәреже айырмашылығы.= 14,96, p = 0,010)，但不是较差的消退(Орташа дәреже айырмашылығы. = 12,86, p = 0,113) 或恐惧回忆组(Орташа дәреже: 29,01 б.)家庭笼组（图4I ).= 14,96, p = 0,010)，但不是较差的消退(Орташа дәреже айырмашылығы. = 12,86, p = 0,113) ）。Екіншіден, жақсы, жаман, қорқынышты еске түсіру және үй жасушалары топтары (X2 (3) = 13.89, p = 0.003) арасында pPVT-дегі Фос экспрессиясында айтарлықтай айырмашылықтар болды, бұл жақсы қабылдау тобын құрады (орташа дәрежедегі айырмашылық = 14.96)., p = 0,010), бірақ не хуже по угашению (средняя разница рангов = 12,86, p = 0,113) немесе группе отзыва страха (средняя разница рангов = 2,571, p > 0,999), чем в группе домашней клет. . , p = 0,010), бірақ жойылу (орташа дәреже айырмашылығы = 12,86, p = 0,113) немесе қорқынышты еске түсіру тобы (орташа дәреже айырмашылығы = 2,571, p > 0,999) үй жасушалары тобына қарағанда нашар емес (4I сурет)..Дегенмен, pPVT Fos экспрессиясы мен жойылуды еске түсіру (rs = 0,051, p = 0,825) арасында маңызды корреляция болмады (4J сурет).Соңында, жақсы жойылуы, нашар жойылуы, қорқынышты есте сақтаулары бар топтар арасында және үй жасушаларында (X2 (3) = 12,34 p = 0,006) pPVT IL афференттеріндегі Fos экспрессиясында айтарлықтай айырмашылық болды, сондықтан IL-дегі жақсы Fos экспрессиясы болды. жойылу топтарына қарағанда нашар (орташа дәреже айырмашылығы = 12,54, p = 0,014) және үй ұяшығына (орташа дәреже айырмашылығы = 12,89, p = 0,049) (4K-сурет) және белсендіру мен pPVT арасындағы IL афференттерімен айтарлықтай корреляцияланған. жойылудың күшін жою, жойылуды жақсырақ еске түсіру осы IL афференттерінің көбірек активтенуімен байланысты болды (rs = -0,438, p = 0,047) (4L-сурет).
Фос белсенділігі егеуқұйрықтардағы артқы паравентрикулярлық таламустың (PVT) IL афференттерінде жоғарылады, бұл жақсы регрессияны көрсетті.(A) aPVT-де Fos өрнекіндегі топтар арасында айтарлықтай айырмашылықтар болған жоқ.(B) aPVT-де Fos экспрессиясы мен жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(C) Қорқынышты еске түсіру тобы барлық басқа топтармен салыстырғанда IL афференттерінде Фос экспрессиясының жоғарылауын көрсетті.(D) IL афферентіндегі Fos экспрессиясы мен aPVT-де жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(E) mPVT-де Фос экспрессиясында айтарлықтай топаралық айырмашылықтар болған жоқ.(F) mPVT-де Fos экспрессиясы мен жойылу жады арасында маңызды корреляция болмады.(G) mPVT-дегі афферентті IL жасушаларында фос экспрессиясы топтар арасында айтарлықтай ерекшеленбеді.(H) IL афферентіндегі Fos экспрессиясы мен mPVT-де жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(I) Жақсы жойылған топ, бірақ басқа топ жоқ, үй тор тобымен салыстырғанда pPVT-де Fos белсенділігінің жоғарылауын көрсетті.(J) Fos экспрессиясы мен pPVT-де жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(K) Жақсы жойылу тобы әлсіз жойылу тобымен және үй жасушалары тобымен салыстырғанда IL афферентті жасушаларында Фос экспрессиясының жоғарылауын көрсетті.(L) IL афференттеріндегі Fos экспрессиясы мен жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция бар, сондықтан жақсы жойылуды еске түсіру IL афференттеріндегі Fos экспрессиясының жоғарылауымен байланысты.Қате жолақтары орташа мәннің стандартты ауытқуын білдіреді. *p <0,05, **p <0,01. *p <0,05, **p <0,01. *р < 0,05, **р < 0,01. *p <0,05, **p <0,01. *p <0,05，**p <0,01. *p <0,05，**p <0,01. *р < 0,05, **р < 0,01. *p <0,05, **p <0,01.
Содан кейін егеуқұйрықтардың aCLA және mCLA-дағы жаһандық және IL проекциясына тән Fos белсенділігі барлық топтарда талданды. aCLA-да (X2 (3) = 8,455, p = 0,036) Фос өрнекіндегі жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй торы топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды, сондықтан қорқынышты еске түсіретін топ (Орташа дәреже айырмашылығы =). 14,50, p = 0,049), бірақ кедейлер де (Орташа дәреже айырмашылығы = 10,21, p = 0,373) немесе жақсы жойылу (Орташа дәреже айырмашылығы = 4,607, p > 0,999) топтары үй торы тобына қарағанда көбірек Fos өрнегін көрсетпеді ( 5А-сурет). aCLA-да (X2 (3) = 8,455, p = 0,036) Фос өрнекіндегі жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй торы топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды, сондықтан қорқынышты еске түсіретін топ (Орташа дәреже айырмашылығы =). 14,50, p = 0,049), бірақ кедейлер де (Орташа дәреже айырмашылығы = 10,21, p = 0,373) немесе жақсы жойылу (Орташа дәреже айырмашылығы = 4,607, p > 0,999) топтары үй торы тобына қарағанда көбірек Fos өрнегін көрсетпеді ( 5А-сурет). Между группами с хорошим угашением, плохим угашением, припоминанием страха и домашними клетками наблюдалась значительная разница в экспрессии Fos в aCLA (X2 (3) = 8,455, p = 0,036), так что что група 4, p = 0,036 припоминания = 0,049), бірақ ни плохая (средняя ранговая разница = 10,21, p = 0,373), ни группа с хорошим вымиранием (средняя ранговая разница = 4,607, p > 0,999) не демонстрировались (средняя ранговая разница = 10,21, p = 0,999) 5А). Жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй жасушалары топтары (X2(3) = 8,455, p = 0,036) арасында aCLA Fos экспрессиясында айтарлықтай айырмашылық болды, осылайша қорқынышты еске түсіретін топ (орташа дәреже айырмашылығы = 14,50, p) = 0,049), бірақ кедейлер де (орташа дәреже айырмашылығы = 10,21, p = 0,373) де, жақсы жойылу тобы да (орташа дәреже айырмашылығы = 4,607, p > 0,999) үйдегі ұяшықтар тобына қарағанда көбірек Fos экспрессиясын көрсетпеді (.5A-сурет) . aCLA 中Fos 表达的良好消退、消退差、恐惧回忆和家庭笼组之间存在显着巴存在显着川(X 5) = 3, 5.因此恐惧回忆组(Орташа дәреже айырмашылығы. = 14,50，p = 0,049），但无论是差（平均秩差= 10,21，p = 0,373）还是良好灭绝（平均秩.（平均秩.（（平均秩.，，，，，，都显示出比家庭笼组更多的Fos 表达（图5A) . Acla 中 fos 表达 的 消退 、 消退差 、 回忆 和 家庭 笼组 之间 存在 显着 差在 显着 差宮巂异异 (x2 (3) = 8,455, p = 0,036) ， 因此 恐惧 回忆组 回忆组 回忆组 回忆组 (мағынасы Дәреже айырмашылығы = 14,50 ， P = P = P = P = P = 14. 0,049） ， 但 无论是 差 平均 秩差 秩差 = 10,21 ， 3） 罥（平均 秩差 秩差 = 4,607， p> 0.999） 组 都 出 比 家庭 笼组 更 多 的 表达 图 图 图 5a) 。 Была значительная разница между группами с хорошим угашением, плохим угашением, отзывом страха и домашней клеткой по экспрессии Fos в aCLA (X2(3) = 8,455, p = 0,036), поэтому страт 4, p = 0,036 = 0,049), бірақ группы с плохим (средняя разница рангов = 10,21, p = 0,373) және с хорошим вымиранием (средняя разница рангов = 4,607, p > 0,999) показали более высокую, чрис экспрессию тобы. 5A). aCLA Fos экспрессиясында жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй жасушалары топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды (X2 (3) = 8,455, p = 0,036), сондықтан қорқынышты еске түсіру тобы (орташа дәреже айырмашылығы = 14,50), p = 0,049 ), бірақ нашар (орташа дәреже айырмашылығы = 10,21, p = 0,373) және жақсы жойылуы бар топтар (орташа дәреже айырмашылығы = 4,607, p > 0,999) үй жасушалары тобына қарағанда жоғары Fos экспрессиясын көрсетті (5А-сурет). .(rs = 0,036, p = 0,876) (5В-сурет) немесе IL aCLA афферентті жасушаларындағы Fos экспрессиясы (rs = -0,282, p = 0,215) және жойылуды еске түсіру (5В-сурет) жаһандық Fos өрнектері арасында маңызды корреляция болмады..5D), сондай-ақ aCLA IL афференттеріндегі Fos экспрессиясындағы жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй жасушалары топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болмады (X2 (3) = 6.722, p = 0.081) (5C сурет)..). Әрі қарай, mCLA (X2 (3) = 10,12, p = 0,018) Фос өрнекіндегі жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй торы топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды, осылайша жақсы жойылу тобы (Орташа дәреже айырмашылығы) . = 12,93, p = 0,038), бірақ нашар жойылу (Орташа дәреже айырмашылығы = 5,143, p > 0,999) немесе қорқынышты еске түсіру топтары (Орташа дәреже айырмашылығы = 14,00, p = 0,063) CLA-да айтарлықтай көбірек көрсетпеді. үй торы тобына қатысты (Cурет 5E). Әрі қарай, mCLA (X2 (3) = 10,12, p = 0,018) Фос өрнекіндегі жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй торы топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды, осылайша жақсы жойылу тобы (Орташа дәреже айырмашылығы) . = 12,93, p = 0,038), бірақ нашар жойылу (Орташа дәреже айырмашылығы = 5,143, p > 0,999) немесе қорқынышты еске түсіру топтары (Орташа дәреже айырмашылығы = 14,00, p = 0,063) CLA-да айтарлықтай көбірек көрсетпеді. үй торы тобына қатысты (Cурет 5E). Затем наблюдалась значительная разница между группами с хорошим угашением, плохим угашением, воспоминаниями о страхе және домашней клеткой в ​​​​экспрессии Fos в mCLA (X2 (3) = 10,12, p = 0,018), сондай-ақ хорошим группами (X2 (3) = 10,12, p = 0,018) рангов . = 12,93, p = 0,038), бірақ ни группы плохого угашения (средняя ранговая разница = 5,143, p > 0,999), ни группы отзыва страха (средняя ранговая разница = 14,00, p = 0,0 показали) экспрессии Fos және mCLA. Содан кейін mCLA Fos экспрессиясында жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқыныш естеліктері мен үй жасушалары топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды (X2 (3) = 10,12, p = 0,018), сондықтан жақсы жойылу тобы (орташа айырмашылық дәрежесі = 12,93, p). = 0,038), бірақ нашар жойылу топтары да (орташа дәреже айырмашылығы = 5,143, p > 0,999) да, қорқынышты еске түсіретін топтар да (орташа дәреже айырмашылығы = 14,00, p = 0,063) mCLA-да айтарлықтай үлкен Fos өрнек көрсетпеді.үй торы тобымен салыстырғанда (5Е-сурет).接下来 ， 在 mcla 中 的 fos 表达 ， 良好 消退组 、 不良 消 退组 、 恐惧 回 回间 显着 差异 （x2 （3） = 10,12, p = 0,018）, 良好 （（（（（（ （（（ Орташа дәреже айырмашылығы .= 12,93, p = 0,038)，但在mCLA 中，弱消退（平均秩差= 5,143，p > 0,999）和恐惧回（04.忆忆忆忆，p = 0,063）均未显示出更多的Fos 表达相对于家庭笼组（图5E）。 = 12,93, p = 0,038) ， 在 在 mcla 中 Ｑ消退 （平均 秩差 秩差 秩差 = 5,143 ＄ 9， 9， 9， 在 在 mcla 中.平均 秩差 = 14,00 ， p = 0,063） 未 显示 出 更 多 的fos 表达 表达 的 fos 表达 表达 的 fos 表达相对于家庭笼组（图5E）。 Далее, в экспрессии Fos в mCLA наблюдалась значительная разница между группой с хорошим угасанием, группой с плохим угасанием, группой с отзывом о страхе және группой с домашней клеткой (X2(3) = 10,12, p = 0,01), такше, 01 угашения (средняя разность рангов = 12,93, p = 0,038), бірақ в mCLA ни слабое угасание (средняя разница рангов = 5,143, p > 0,999), ни группа отзыва страха (средняя разница рангов, = 190, p = 190) = 0,063) показали лучшую экспрессию Много Фос по сравнению с группой с домашней клеткой (Рисунок 5E). Әрі қарай, жақсы жойылу тобы, нашар жойылу тобы, қорқынышты кері байланыс тобы және үй жасушалары тобы (X2 (3) = 10,12, p = 0,018) арасында mCLA-дағы Fos экспрессиясында айтарлықтай айырмашылық болды, осылайша, жақсы жойылу (орташа дәреже айырмашылығы = 12,93, p = 0,038), бірақ mCLA-да әлсіз жойылу (орташа дәреже айырмашылығы = 5,143, p > 0,999) немесе қорқынышты еске түсіру тобы (орташа дәреже айырмашылығы = 14,00, p = 0,999) = 0,06 жақсырақ көрсетті. Үй ұяшықтары тобымен салыстырғанда Multi Fos өрнегі (5E-сурет).Дегенмен, mCLA (rs = 0,321, p = 0,156) (5F-сурет) немесе афферентті IL mCLA жасушаларында (rs = -0,121, p = 0,602) жаһандық Fos экспрессиясы және жойылуды еске түсіру (5H-сурет), арасында айтарлықтай айырмашылық жоқ. жақсы жойылуы, нашар жойылуы, қорқынышты еске түсіру және IL mCLA афферентті жасушаларында Фос экспрессиясы үшін үй жасушасы бар топтар (X2 (3) = 4.923, p = 0.178) (5G-сурет).
Фос белсенділігі жақсы жойылу жадысы бар егеуқұйрықтардың орта кластарында жоғарылаған.(A) Қорқынышты еске түсіру тобы, бірақ басқа топтар емес, aCLA-дағы үй жасушалары тобымен салыстырғанда Fos белсенділігінің жоғарылауын көрсетті.(B) aCLA-дағы Fos экспрессиясы мен жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(C) IL афферентті aCLA жасушаларында фос экспрессиясы топтар арасында айтарлықтай ерекшеленбеді.(D) IL афферентіндегі Fos экспрессиясы мен aCLA-да жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(E) Ұңғыманың жойылған тобы, бірақ басқа топтар емес, үй жасушалары тобымен салыстырғанда mCLA-да Fos белсенділігінің жоғарылауын көрсетті.(F) mCLA-да Fos экспрессиясы мен жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(G) IL mCLA афферентті жасушаларында фос экспрессиясы топтар арасында айтарлықтай ерекшеленбеді.(H) IL афферентіндегі Fos экспрессиясы мен mCLA-да жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.Қате жолақтары орташа мәннің стандартты ауытқуын білдіреді. *p <0,05. *p <0,05. *р < 0,05. *p <0,05. *p <0,05. *p <0,05. *р < 0,05. *p <0,05.
Содан кейін егеуқұйрықтардың барлық топтарында mBLA және pBLA-дағы жаһандық және IL проекциясына тән Fos белсенділігі талданды.mBLA-да (X2(3)=0,944, p=0,815) Фос экспрессиясындағы жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй жасушаларының топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болмады (6А-сурет).Сондай-ақ IL mBLA афференттік жасушаларында жақсы регрессия, нашар регрессия, қорқынышты еске түсіру және үй жасушасының Fos экспрессиясы бар топтар арасында айтарлықтай айырмашылық болмады (X2 (3) = 0,518, p = 0,915) (6C сурет).Сонымен қатар, mBLA (rs = 0,126, p = 0,588) (6В-сурет) және IL mBLA афферентті жасушаларындағы Fos экспрессиясы (rs = 0,200, p = 0,385) (rs = 0,200, p) (rs = 0,126, p = 0,588) жаһандық Fos өрнектері арасында маңызды корреляция болмады. = 0,385).p = 0,385).6D сурет) және жойылуды еске түсіру.Сондай-ақ, pBLA (X2(3) = 4,246, p = 0,236) (6E-сурет) Фос экспрессиясында жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқыныш жады және үй жасушалары топтарында айтарлықтай айырмашылық болмады, сонымен қатар айтарлықтай айырмашылық болмады. pBLA жақсы.жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және IL афферентті жасушаларында Фос экспрессиясындағы үй жасушаларының топтары (X2 (3) = 1,954, p = 0,582) (6G-сурет).Соңында, pBLA-дағы жаһандық Fos экспрессиясы (rs = 0,070, p = 0,762) (6F-сурет) және pBLA IL афферентті жасушаларындағы Fos экспрессиясы (rs = 0,122, p = 0,597) және жойылуды еске түсіру (сур. 6H).
Жоюдың көбеюіндегі жеке айырмашылықтар базолатеральды амигдалада Фос экспрессиясындағы айырмашылықтармен салыстырылмаған.(A) mBLA-дағы Fos экспрессиясында айтарлықтай топаралық айырмашылықтар болған жоқ.(B) mBLA-да Fos экспрессиясы мен жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(C) IL mBLA афферентті жасушаларында фос экспрессиясы топтар арасында айтарлықтай ерекшеленбеді.(D) IL афферентті жасушаларында Фос экспрессиясы мен mBLA-да жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(E) pBLA-да Fos экспрессиясында айтарлықтай топаралық айырмашылықтар болған жоқ.(F) pBLA-да Fos экспрессиясы мен жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(G) Афферентті IL pBLA жасушаларында фос экспрессиясы топтар арасында айтарлықтай ерекшеленбеді.(H) IL афферентті жасушаларында Фос экспрессиясы мен pBLA-да жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.Қате жолақтары орташа мәннің стандартты ауытқуын білдіреді.
Соңында, жаһандық және IL проекциясына тән Fos белсенділігі mvHPC және pvHPC барлық егеуқұйрықтарда талданды. mvHPC (X2 (3) = 8,056, p = 0,045) Фос өрнекіндегі жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй торы топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды, осылайша жақсы жойылу (Орташа дәреже айырмашылығы = 13,29). , p = 0,031), бірақ нашар жойылу да (Орташа дәреже айырмашылығы. = 6,857, p> 0,999) немесе қорқынышты еске түсіру (Орташа дәреже айырмашылығы. = 8,000, p = 0,864) топтар үйдегі тор тобына қарағанда көбірек Фос өрнектерін көрсетті (Cурет. 7A). mvHPC (X2 (3) = 8,056, p = 0,045) Фос өрнекіндегі жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй торы топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды, осылайша жақсы жойылу (Орташа дәреже айырмашылығы = 13,29). , p = 0,031), бірақ нашар жойылу да (Орташа дәреже айырмашылығы. = 6,857, p> 0,999) немесе қорқынышты еске түсіру (Орташа дәреже айырмашылығы. = 8,000, p = 0,864) топтар үйдегі тор тобына қарағанда көбірек Фос өрнектерін көрсетті (Cурет. 7A). Между группами с хорошим угасанием, плохим угашением, отзывом страха және домашними клетками наблюдалась значительная разница в экспрессии Fos в mvHPC (X2 (3) = 8,056, p = 0,045), так что хорошее угашением, так что хорошее 2, p = 0,045), так что хорошее угашением, редяя 9 = 0,031), бірақ ни в группах с плохим угасанием (средняя ранговая разница = 6,857, p > 0,999), ни в группе с отзывом страха (средняя ранговая разница = 8,000, p = 0,864) экспрессия с плохим угасанием (средняя ранговая разница = 6,857, p > 0,999) клеткой (рис. 7А). Жақсы жойылуы, нашар жойылуы, қорқынышты еске түсіру және үй жасушалары (X2(3) = 8,056, p = 0,045) топтар арасында mvHPC Fos экспрессиясында айтарлықтай айырмашылық болды, сондықтан жақсы жойылу (орташа дәреже айырмашылығы = 13,29), p = 0,031), бірақ нашар жойылу тобында да (орташа дәрежедегі айырмашылық = 6,857, p> 0,999) да, қорқынышты еске түсіру тобында да (орташа дәреже айырмашылығы = 8,000, p = 0,864) Фос экспрессиясы үй тобына қарағанда жоғары болған жоқ.ұяшық (7А-сурет). mvHPC 中Fos 表达的良好消退、不良消退、恐惧回忆和家庭笼组之间存在显的异 =）20.0. 045），因此良好消退（平均秩差= 13,29），p = 0,031 ），但无论是弱消退（平均秩差= 6,857，p > 0,999）还是恐惧回忆（平均秌忆4（平均秌.）08.（平均秌差=都显示出比家庭笼组更多的Fos 表达（图2）。 mvhpc 中 fos 表达 的 消退 、 不良 消退 恐惧 回忆 和 家庭 笼组 家庭 笼组 之间 存圀 （2） .056, p = 0,045） ， 良好 （（平均 秩差 秩差 = 13,29） p = 0,031） ， 但 无论是 弱消退 （平均 秩差 秩差 秩差 = 6,857 ， p> 0,999） 还是 恐惧 （幧箮0.（幧箩差p = 0,864） 组都 出 家庭 笼组 多 的 fos 表达 图 图。。。。 ）））））））））））））））））））））) Имелась значительная разница между группами «хорошо», «плохо», «припоминание страха» және «домашняя клетка» үшін экспрессии Fos в mvHPC (X2(3) = 8,056, p = 0,045) и, следовельно, сия разница реңктері 13,29), p = 0,031), бірақ группы со слабым угасанием (средняя разница рангов = 6,857, p > 0,999) және воспоминания о страхе (средняя разница рангов = 8,000, p = 0,864) домашней клетке (рис. 2). mvHPC (X2 (3) = 8.056, p = 0.045) ішіндегі Fos экспрессиясы үшін жақсы, жаман, қорқынышты еске түсіру және үй жасушалары топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болды, сондықтан жақсы регрессия (орташа дәреже айырмашылығы = 13.29), p = 0,031), бірақ әлсіз жойылуы (орташа дәреже айырмашылығы = 6,857, p > 0,999) және қорқыныш естеліктері (орташа дәреже айырмашылығы = 8,000, p = 0,864) топтар үй торындағы топқа қарағанда жоғары Fos өрнек көрсетті (2-сурет).7A).Дегенмен, айтарлықтай айырмашылық болған жоқ (X2(3) = 4,893, p = 0,180) (7С-сурет).Сонымен қатар, mvHPC (rs = -0,233, p = 0,309) (7В-сурет) және mvHPC афферентті IL жасушаларындағы Fos экспрессиясы (rs = 0,056, p = 0,810) (rs = 0,056, p = 0,810) (7D-сурет) ішінде жаһандық Fos өрнектері арасында маңызды корреляция болмады.және жоғалу туралы есеп.Әрі қарай, pvHPC (X2(3) = 3.623, p = 0.353) (7E-сурет) Фос экспрессиясындағы жақсы жойылу, нашар жойылу, қорқынышты еске түсіру және үй жасушаларының топтары арасында айтарлықтай айырмашылық болмады және айтарлықтай айырмашылықтар болмады.pvHPC афферентті IL жасушаларында Фос экспрессиясының жақсы регрессиясындағы айырмашылық, нашар регрессия, қорқыныш жады және үй жасушалары топтары (X2 (3) = 3.871, p = 0.276) (7G-сурет).Ақырында, pvHPC жаһандық Fos өрнегі (rs = -0,127, p = 0,584) (7F-сурет) және IL-афферентті pvHPC жасушаларындағы Fos экспрессиясы (rs = 0,176, p = 0,447) және жойылуды еске түсіру (7F-сурет) арасында маңызды корреляция болмады. ).7H).
Фос экспрессиясы егеуқұйрықтардың вентральды гиппокампында жоғарылайды, бұл жадтың жақсы жойылуын көрсетеді.(A) Ұңғыманың жойылған тобы, бірақ басқа топтар емес, үй жасушалары тобымен салыстырғанда mvHPC-де Фос экспрессиясының жоғарылауын көрсетті.(B) mvPHC-те Fos экспрессиясы мен жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(C) mvHPC афферентті IL жасушаларында фос экспрессиясы топтар арасында айтарлықтай ерекшеленбеді.(D) IL афферентіндегі Fos экспрессиясы мен mvHPC-де жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(E) pvHPC ішіндегі Fos өрнекіндегі топтар арасында айтарлықтай айырмашылықтар болған жоқ.(F) Fos экспрессиясы мен pvHPC-де жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.(G) pVHPC афферентті IL жасушаларында фос экспрессиясы топтар арасында айтарлықтай ерекшеленбеді.(H) IL афферентіндегі Fos экспрессиясы мен pvHPC-де жойылуды еске түсіру арасында маңызды корреляция болмады.Қате жолақтары орташа мәннің стандартты ауытқуын білдіреді. *p <0,05. *p <0,05. *р < 0,05. *p <0,05. *p <0,05. *p <0,05. *р < 0,05. *p <0,05.Біздің барлық аймақтарға арналған алғашқы талдауымыз алдыңғы-артқы ось бойымен үш деңгейде салыстыруды көрсетті, дегенмен біз алдыңғы-артқы ось бойымен құлаған әрбір аймақты талдадық.Бұл талдаулардың нәтижелері 1 кестеде берілген.
Мұнда біз жойылуды еске түсірудегі жеке айырмашылықтар төменгі лимбиялық кортекстегі афферентті белсенділіктің әртүрлі үлгілерінде көрінетінін тексердік.Осы мақсатта біз жойылу қайталауынан кейін паравентрикулярлық таламустан, клауструмнан, базолатеральды бадамшадан және вентральды гиппокамптан IL проекцияларындағы Фос белсенділігін бағаладық.IL-жобалаушы жасушаларда біз нашар жойылатын егеуқұйрықтармен салыстырғанда жақсы жойылуды еске түсіретін егеуқұйрықтарда ПВТ-ның артқы аймағында жоғары белсенділікті таптық.Клавикулярлық ядродан, вентральды гиппокамптан немесе базолатеральды бадамша безінен IL афференттерінің айырмашылығы жоқ.IL-проекциялаушы жасушалардан басқа, егеуқұйрық клаустры мен вентральды гиппокамптың таңдаулы аймақтарында жақсы ажыратымдылықпен нейрондық белсенділіктің жоғарылауы байқалды.Біздің нәтижелеріміз сәтті жойылу жадысы клауструмдағы және вентральды гиппокамптағы IL және IL мақсатты емес жасушаларға арнайы PVT проекциялары арқылы ұйымдастырылғанын көрсетеді.
Біз PVT IL болжамы жойылуды жақсы еске түсіретін егеуқұйрықтарда белсенді екенін анықтадық, бұл PVT жойылуды еске түсіру үшін қажет екенін көрсететін жақында жүргізілген зерттеуге сәйкес келеді.Бұл зерттеу субаймаққа тән манипуляцияларды пайдаланбады, бірақ бүйірлік орталық амигдаладағы PVT проекциялары мен PVT бойынша IL проекциялары жойылуды көбейту үшін қажет екенін көрсетті.Біздің нәтижелер IL-PVT-CeL тізбегінен басқа, сөндіруді қайтарып алу үшін IL-ге PVT-дан кейінгі кіру қажет болуы мүмкін екенін көрсетеді.Осылайша, өшудің көбеюіне эфферентті де, афферентті ИЛ байланыстары да қатысатыны белгілі болды.Келесі маңызды қадам pPVT жүйке тізбегінің деңгейінде жойылу көбеюіне сигнал беретінін анықтау болып табылады.IL-мен қарым-қатынасқа қосымша, алдыңғы каналды бақылау зерттеулері31,32 pPVT вентральды периакведуктальды сұрдан (vPAG) кірісті алатынын көрсетті, ол жойылуды үйренумен байланысты33,34,35,36.vPAG-тің жойылуды еске түсірудегі рөлі анықталмағанымен, vPAG арқылы pPVT болжамы олардың тығыздығына және қорқыныштың жойылуының алдыңғы дәлелдерін жасауға екі аймақтың қатысуына байланысты тартымды үміткер болып табылады.
Біздің PVT нәтижелерінің тағы бір маңызды аспектісі - олардың алдыңғы-артқы ось бойынша маманданғандығы.Бір қызығы, IL-дағы PVT проекциясының нейрондық белсенділігі қарама-қарсы мінез-құлық күйімен корреляцияланады, осылайша IL-дағы PVT проекциясына дейінгі белсенділік қорқынышты еске түсірумен байланысты, ал pPVT проекциясы сәтті еске түсіру жойылғаннан кейін белсенді болады (яғни, қорқыныш).PVT ішіндегі бұл функционалдық гетерогенділік алдыңғы жұмысты ескере отырып таңқаларлық емес [37-де талқыланған].Жақында PVT-де функционалдық үлестірудің жарқын мысалы PVT-дегі нақты жасуша түрлерінің қасиеттерін сипаттайтын зерттеуде пайда болды.Бұл зерттеу DRD2-экспрессиялайтын дофамин жасушалары негізінен pPVT-де экспрессияланатынын, алдыңғы аяқтың қыртысын иннервациялайтынын және жағымсыз ынталандыруға жауап беретінін көрсетеді.Екінші жасуша популяциясы басым түрде aPVT-де көрінеді және төмен физиологиялық қозу күйіне өтуді белгілейді және төменгі аяқтардың қыртысын иннервациялайды.Біздің нәтижелеріміз бұл үлгіге сәйкес келмейді, өйткені IL-жобалаушы aPVT жасушалары қорқынышты еске түсіру кезінде белсенді, ал pPVT проекциялары белсенді және жануарларда қорқыныш деңгейі төмен.Көрінетін сәйкессіздіктің кем дегенде екі мүмкін түсіндірмесі бар.Біріншіден, анықталған жасуша түрлері ТВВ-ның бір алдыңғы-артқы бөлігінде ғана орналаспайды.Осылайша, жақсы жойылу жадысы бар егеуқұйрықтардағы белсенді IL-проекциялайтын pPVT жасушалары aPVT-те анықталу ықтималдығы жоғары және төмен қозу күйіне өту туралы сигнал беретін жасушалар класына жатуы мүмкін.Қорқыныш жадысынан кейін белсендірілген aPVT ішіндегі IL-проекциялаушы жасушалар үшін де дәл солай болуы мүмкін.Екіншіден, алдыңғы бақылау зерттеулері IL3-проекциялайтын pPVT-лардың болуын анықтады, бірақ кейбіреулері DRD2-құрамында бар жасушалардан алынған сияқты, басқа жасушалар түрлері IL-ге проекциялануы және сөндірудің сәтті көбеюінен кейін белсендірілуі мүмкін.
Бұл зерттеудің мақсаты әртүрлі жойылу фенотиптерін көрсететін егеуқұйрықтар арасындағы айырмашылықтарды анықтау болғанымен, бұл эксперименттер қорқыныш жады механизмдеріне қатысты жаңа деректерді де ашты.Бір қызығы, біз қорқынышты жады бар егеуқұйрықтарда алдыңғы CLA-да Fos белсенділігінің жоғарылауын байқадық.
Клавикула кортикальды байланыстың орталығы ретінде орналасқан және сенсорлық интеграциядан зейін мен ұйқыға дейінгі процестерге қатысады40,41,42,43.Клауструмның қорқынышты күйге келтіруге немесе қорқынышты білдіруге қалай қатысатыны туралы шектеулі дәлелдер бар, дегенмен, бұрынғы зерттеулер контекстік қорқыныш көрінісі клаустрдағы Фос әрекетіне қатысатынын көрсетті.Жақында контекстік қорқынышты кондициялау кезінде энторинальды кортекске атрезиялық проекциялардың тежелуі ұзақ мерзімді жадының қалыптасуын нашарлатады, дегенмен олардың қорқыныш сезімін білдіру қажеттілігі тексерілмеген.Сол зерттеуде жануарларға таныс ортаға әсер еткен тышқандармен салыстырғанда жаңа ортаға ұшыраған кезде Fos белсендіруінің жоғарылауы байқалды.Осыны ескере отырып, біз осы жерде хабарлайтын CLA белсендіру қайта шақыру қорқынышынан емес, сынақ кезінде жаңа камераның әсерінен болуы мүмкін.Қорқыныш пен ситуациялық өңдеудегі құлыптардың функциясын дәлірек сипаттау үшін болашақ зерттеулерде мақсатты құлыптау манипуляциясын қолдану керек.
Алдыңғы жұмыс PVT қорқынышты жадының көрінісімен байланысты екенін көрсеткенімен, 45,46,47 біз егеуқұйрықтарда 48 сағаттан кейін қорқынышты еске түсіргенде, жалпы Фос экспрессиясының өзгерісін байқамадық.Бұл айырмашылықты бірнеше факторлармен түсіндіруге болады, соның ішінде кондициялау орын алған контексте дискретті белгілердің алдындағы қорқынышты тестілеу, ал біздің экспериментімізде тестілеу жаңа бөлмеде жүргізілді.Бұған қоса, біз жануарларды тестілеуден кейін 60 минуттан кейін эвтанизация жасадық, ал алдыңғы жұмыс 90 минуттық уақыт нүктесін пайдаланды.Ақырында, алдыңғы зерттеулерде сынақ жануарлардың аппетитпен жауап бере алатын бөлмеде жүргізілді, ал біздің жұмысымызда егеуқұйрықтар аппетитсіз сыналған.Бұл белгілі бір дәрежеде шартты тежелуге мүмкіндік бергенімен, жануарлардың қорқу белгілері мотивациялық қақтығыс тудыратынын (яғни, қорқыныш пен сыйақы) тудыратынын тексеру кезінде азық-түлік алу үшін қысымды тежеуге мүмкіндік беретін дәлелдер бар, бұл негізгі ынталандырушы фактор болып табылады.қатысу PVT48, 49. .
Базолатеральды амигдаланың қорқыныштың жойылуына 50,51 қатысатыны белгілі және IL-ге BLA проекциялары да осы процеске қатысқаны туралы дәлелдер бар23.Дегенмен, BLA және оның қосылыстарының жойылу қайтарылуына қатысы бар-жоғы анық емес.Бейнелеу зерттеулері23,28 өшіп қалған естеліктерді еске түсіретін жануарларда BLA белсенділігінің жоғарылағанын көрсетті.Біздің алдыңғы жұмысымыз жойылып кететін жақсы және жаман егеуқұйрықтар арасындағы BLA белсендіруінде ешқандай айырмашылықты көрсетпегенімен, мұндағы нәтижелер жойылуды еске түсіру әдетте BLA немесе BLA IL болжауындағы белсендіруге әсер етпейтінін көрсетеді.Біздің қорытындыларымызға сәйкес, тізбекті манипуляциялау зерттеулері BLA-ға IL кірістері жойылуды үйрену үшін маңызды екенін көрсетеді, бірақ олар жойылуды еске түсіру үшін қажет емес.Дегенмен, BLA рөлін толығымен елемеуге болмайды, өйткені соңғы дәлелдер BLA-дағы белгілі бір жасуша түрлері жойылуды көбейту үшін қажет екенін көрсетеді.
Атап айтқанда, қорқынышты еске түсіру BLA-да Фостың белсендірілуіне әкелмеді, өйткені алдыңғы зақымдану, есірткі және бейнелеу зерттеулері бұл аймақты қалпына келтіруден кейін қорқыныш сезімін білдіруге және/немесе қорқынышты қайта біріктіруге әсер етті54,55,56,57.Мұнда ұсынылған деректер амигдаланың базальды және бүйірлік субядросын біріктіреді және алдыңғы деректер қорқыныштың бүйірлік ядроның дорсальды жағындағы Фос белсенділігін басқарады деп болжайды.Біз негізгі және бүйірлік деректерді бөлек талдадық, бірақ екі жағдайда да айырмашылық болған жоқ (деректер көрсетілмеген) және біз мұнда ұсынатын деректерде екі аймақ та құлады.Біз бүйірлік амигдаланың субрегиондарын талдаған жоқпыз, сондықтан бұл аймақтағы нақты өзгерістер маскирленген болуы мүмкін.BLA-дағы Fos белсенділігінің өзгермеуінің тағы бір мүмкіндігі кондициямен салыстырғанда қорқыныш естеліктерінің уақытына байланысты.Кейбір алдыңғы жұмыстар BLA-ның қорқыныш көрінісіне қосқан үлесі кондициядан кейін уақыт өткен сайын төмендейтінін көрсетті, осылайша өрнек кондициядан кейінгі 24 сағатта BLA-ға тәуелді, бірақ 7 күнде тәуелсіз болады (45-ті, бірақ 58-ді қараңыз).Жаттығудан кейін 48 сағаттан кейін орын алды, бұл кезде Фос белсенділігінің өзгеріссіздігі қорқынышты білдіруге BLA қатысуындағы уақытқа байланысты өзгерістерді көрсетуі мүмкін.
Ақырында, сәтті жойылу жадының вентральды гиппокамппен байланысты екендігі туралы дәлелдерді табамыз.Бұл «аралық» vHPC-ге тән, өйткені артқы аймақта бірдей үлгі байқалмаған.Алдыңғы жұмысқа сәйкес, біз афферентті vHPC IL-де Fos белсендіруінде ешқандай өзгеріс таппадық.vHPC28,60,61 CS өшуі орын алатын контекстен тыс орын алған кезде қорқынышты іске асыру үшін қажет және бұл кем дегенде ішінара IL13 жүйесіне vHPC кіруіне байланысты болатынына елеулі дәлелдер бар.Осы алдыңғы нәтижелерге сүйене отырып, біз нашар өшу vHPC болжамды IL белсенділігінің жоғарылауымен байланысты болады деп күтеміз.Дегенмен, бұлай болмады, өйткені IL-жобаланған ретроградтық таңбаланған vHPC немесе vHPC-де таңбаланбаған ұяшықтардағы Fos белсенділігінде ешқандай айырмашылық болмады.Бұл әлсіреу контекстінде өшуді есте сақтау қабілетсіздігі жаңарудан қорқудан басқа механизмді тудыруы мүмкін екенін көрсетеді.
Дизайн мен талдауға тән кейбір шектеулерді және олардың қорытындыларымызға қалай әсер ететінін атап өту маңызды.Біріншіден, біз жануарларды жоғарғы және төменгі үштен бір бөлікке, ал тышқандарды «жақсы» және «жаман» деп құрып кетуді еске түсіру ұпайларына бөлдік.Бұл жануарларды таралу ортасынан бөлек топтарға бөлетін топтық схемаларды немесе ортадан бөлу немесе егеуқұйрықтардың жоғарғы және төменгі үштен бір бөлігін салыстыру сияқты жануарларды таралу ортасынан алып тастайтын топтық схемаларды болдырмау үшін жасалады. .біз бұл жағдайдан аулақ болғымыз келеді, өйткені медианалық бөлу біз модельдеуге тырысып жатқан жарақатқа адамның жауаптарының өзгермелілігін көрсетпейді.Сонымен қатар, егеуқұйрықтардың жоғарғы және төменгі үштен бір бөлігін салыстыру бізге ұқсас көлемдегі топтарды салыстыруға мүмкіндік береді, бұл тәсіл таралу орталығында жануарларды елемейді және жарақатқа реакциялардың өзгергіштігін дәл көрсетпейді.Біздің әдіс гетерогенді дисперсиямен және тең емес іріктеу өлшемдері бар топтарды салыстырумен байланысты мәселелерден зардап шегуі мүмкін, бірақ ол баламалы әдістерге қарағанда жақсырақ имитациялауға тырысады.
Мұнда ұсынылған нәтижелер жойылуды еске түсірудегі жеке айырмашылықтар нейрондық тізбек белсенділігіндегі айырмашылықтарда қалай көрсетілетінін жақсы түсінуге көмектеседі.Біздің қорытындыларымыз шамадан тыс қорқынышпен және қорқыныш реакцияларын жою қабілетсіздігімен байланысты екені белгілі жарақаттан кейінгі стресстік бұзылуларға қатысты болуы мүмкін.Біз жойылуды еске түсірудегі айырмашылықтар ИЛ-ге жобаланатын ішкі және сыртқы жүйке белсенділігінің айырмашылығымен байланысты екенін көрсетеміз.Бұл айырмашылықтар алдыңғы-артқы ось бойымен әртүрлі аймақтарға таратылды, бұл мидың қызметін субаймақтық деңгейде бағалаудың маңыздылығын одан әрі көрсетеді.Қазіргі әдістің кемшіліктері зерттеудің өзектілігін және аталық кеміргіштерге назар аударуды қамтиды.Болашақ зерттеулер кеміргіштердің аналықтарында жойылып кетуді үйренудің негізінде жатқан нейробиологиялық механизмдерді анықтауы және себеп-салдарлық қорытынды жасау әдістерін қолдануы керек.
Ағымдағы зерттеуде пайдаланылған және/немесе талданған деректер жинақтары негізделген сұрау бойынша тиісті авторлардан қол жетімді.
Павлов И.П. Кондициялау: ми қыртысының физиологиялық белсенділігін зерттеу.(Оксфорд университетінің баспасы, 1927).
Rothbaum, BO, & Davis, M. Жарақаттан кейінгі реакцияларды емдеуде оқыту принциптерін қолдану. Rothbaum, BO, & Davis, M. Жарақаттан кейінгі реакцияларды емдеуде оқыту принциптерін қолдану.Ротбаум Б.О және Дэвис М. Посттравматикалық реакцияларды емдеуде оқыту принциптерін қолдану.Ротбаум Б.О және Дэвис М. Посттравматикалық реакцияларды емдеуде оқыту принциптерін қолдану.орнату.Нью-Йорк колледжі.ғылым.1008(1), 112-121 (2003).
Rauch, SA, Eftekhari, A. & Ruzek, JI. Экспозициялық терапияға шолу: PTSD емдеудің алтын стандарты. Rauch, SA, Eftekhari, A. & Ruzek, JI. Экспозициялық терапияға шолу: PTSD емдеудің алтын стандарты.Рауч С.А., Эфтехари А. және Рузек Д.И. Экспозициялық терапияға шолу: жарақаттан кейінгі стресстік бұзылыстың алтын стандартты емі. Rauch, SA, Eftekhari, A. & Ruzek, JI 暴露疗法回顾：PTSD 治疗的黄金标准。 Rauch, SA, Eftekhari, A. & Ruzek, JI. Экспозициялық терапияға шолу: PTSD емдеудің алтын стандарты.Рауч, С.А., Эфтехари, А. және Рузек, Д.И. Экспозициялық терапияға шолу: жарақаттан кейінгі стресстік бұзылыстардың алтын стандартты емі.J. Реабилитация.су қоймасын игеру 49, 679–687.https://doi.org/10.1682/jrrd.2011.08.0152 (2012).
Foa, EB Ұзақ экспозициялық терапия: өткен, қазіргі және болашақ.Мазасыздықтың басылуы 28, 1043–1047.https://doi.org/10.1002/da.20907 (2011).
Миллард мырза және т.б.Посттравматикалық стресс бұзылыстарындағы жадтың жоғалуының экзистенциалды және жүре пайда болған себептері: егіздік зерттеудің нәтижелері.Дж. психиатр.сақтау ыдысы.42(7), 515-520 (2008).
Миллард мырза және т.б.Посттравматикалық стресстік бұзылыс кезінде өшіп қалған естеліктерді еске түсіре алмаудың нейробиологиялық негізі.биология.Психология.66(12), 1075-1082 (2009).
Буш, DEA, Sotres-Bayon, F. & LeDoux, JE Қорқыныштағы жеке айырмашылықтар: қорқыныш реактивтілігін және қорқынышты қалпына келтіру фенотиптерін оқшаулау. Буш, DEA, Sotres-Bayon, F. & LeDoux, JE Қорқыныштағы жеке айырмашылықтар: қорқыныш реактивтілігін және қорқынышты қалпына келтіру фенотиптерін оқшаулау.Буш, DEA, Sautre-Baillon, F. және LeDoux, JE Қорқыныштағы жеке айырмашылықтар: қорқыныш реактивтілігінің фенотиптерін ажырату және қорқынышты қалпына келтіру. Буш, DEA, Sotres-Bayon, F. & LeDoux, JE 恐惧的个体差异:隔离恐惧反应和恐惧恢复表型。 Буш, DEA, Sotres-Bayon, F. & LeDoux, JE Қорқыныштағы жеке айырмашылықтар: қорқыныш реакциясын оқшаулау және қорқынышты қалпына келтіру кестесі.Буш, DEA, Sautre-Baillon, F. және LeDoux, JE Қорқыныштағы жеке айырмашылықтар: қорқыныш реакцияларының оқшаулануы және қорқынышты қалпына келтіру фенотипі.Ж.Травма.қысым 20(4), 413–422 (2007).
Russo, AS & Parsons, RG егеуқұйрықтардағы дыбыстық шошыту реакциясы қорқыныштың жойылуындағы индивид аралық вариацияны болжайды. Russo, AS & Parsons, RG егеуқұйрықтардағы дыбыстық шошыту реакциясы қорқыныштың жойылуындағы индивид аралық вариацияны болжайды.Руссо, А.С. және Парсонс, RG егеуқұйрықтардағы дыбыстық шошыту реакциясы қорқыныштың жойылуындағы жеке айырмашылықтарды болжайды. Russo, AS & Parsons, RG 大鼠的声学惊吓反应预测恐惧消退的个体差异。 Russo, AS & Parsons, RGРуссо, А.С. және Парсонс, RG егеуқұйрықтардағы дыбыстық шошыту реакциясы қорқыныштың жойылуындағы жеке айырмашылықтарды болжайды.Нейробиология.оқу.Жад.139, 157–164 (2017).
Russo, AS, Lee, J. & Parsons, RG Қорқыныштың жойылуын еске түсірудегі жеке өзгергіштік инфралимбиялық кортексте митогенмен белсендірілген протеинкиназаның фосфорлануымен байланысты. Russo, AS, Lee, J. & Parsons, RG Қорқыныштың жойылуын еске түсірудегі жеке өзгергіштік инфралимбиялық кортексте митогенмен белсендірілген протеинкиназаның фосфорлануымен байланысты.Руссо, А.С., Ли, Дж. және Парсонс, RG Қорқыныштың жойылуының жеке өзгергіштігі инфралимбиялық кортексте митогенмен белсендірілген протеинкиназа фосфорлануымен байланысты. Руссо, AS, Lee, J. & Parsons, RG Russo, AS, Lee, J. & Parsons, RG Қорқыныштың жоғалуын еске түсіру перифериялық 美裯中丝裂原活化筒能激酶的фосфорланудағы жеке айырмашылықтармен байланысты.Руссо, А.С., Ли, Дж. және Парсонс, Р.Г. Еске түсіру кезіндегі қорқыныштың жойылуындағы жеке айырмашылықтар төменгі аяқтың кортексіндегі митогенмен белсендірілген протеинкиназалардың фосфорлануымен байланысты.Психофармакология 236(7), 2039–2048 (2019).